FITC标记抗体七大流程
2017-09-07 16:17:13 点击:
FITC标记抗体七大流程:
流程一: 将待交联的蛋白(浓度31mg/mL)对交联反应液透析三次4℃,至pH=9.0。交联反应液配制方法:7.56g NaHCO3,1.06g Na2CO3,7.36g NaCl,加水定容至1 L。
流程二:将FITC溶于DMSO中,浓度为1mg/mL。每次交联使用的FITC均应新鲜配制,避光。
流程三: 按P:F(蛋白质:FITC)=1mg:150μg 的比例将FITC缓慢加入于抗体溶液中,边加边轻轻晃动使其与抗体混合均匀,暗处4℃反应8h。
流程四:加入5mol/L的NH4Cl至终浓度50mmol/L,4℃终止反应2h。
流程五: 将交联物在PBS中透析四次以上,至透析液清亮。
流程六:交联物的鉴定
蛋白浓度(mg/mL) = [ A280– 0.31×A495 ] / 1.4
F/P比例: 3.1×A495 / [A280 – 0.31×A495 ],该值应介于2.5~6.5之间。
流程七:FITC交联的蛋白应置于pH 7.4的磷酸盐缓冲液中,加入0.1% NaN3、1% BSA,4℃避光保存。
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